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如何测定污水的病毒数?

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如何测定污水的病毒数?

作者:管理员 来源: 日期:2014/5/29 10:38:42 人气: 标签:
有很多名词都用来描述病毒溶液的滴度:Vp (病毒颗粒)或OPV(光学颗粒单位);GTU(基因转移单位)或转导颗粒(BFU即蓝点形成单位,与GTU类似); PFU(空斑形成单位);TCID50(50%组织培养感染剂量)。
不同的概念缘于不同的滴度测定方法,这些方法包括2类:物理方法(VP)和生物学方法(GTU、PFU、TCID50)。
(1)测定VP的方法是测定病毒颗粒在260nm处的吸光度(病毒DNA和蛋白的总吸光度中主要为DNA),1个OD值相当于1.q#X1012个病毒颗粒。用这种方法进行测定在各个实验室中都较为稳定,但它不能区分感染性和缺陷性病毒颗粒。因此这种方法只能提供病毒的量,至于质,比如是否含有缺陷性颗粒则没有考虑在内。
(2)GTU则测定感染后能表达报告基因的细胞数量。这个过程中,病毒将DNA转人细胞,在一个感染周期结束前立即测定表达报告基因的细胞。如果重组腺病毒含有报告基因如GFP或LacZ等则可以用这种方法进行测定,病毒保存液通常不用这种方法来进行描述。
(3)PFU是测定腺病毒滴度早的标准方法,主要测定单层细胞培养中病毒裂解空斑的形成。空斑形成需要许多个感染周期,得到终结果通常需要三个星期。一般来说,这种方法得到的结果很少能在其它实验室重复,即使在同一实验室内,不同技术员操作也很少能得到相同的结果。
(4)TCID50已被用于测定许多种病毒的滴度,但以前并不用于腺病毒。病毒稀释液与细胞在96孔板进行培养,然后监测每孔是否CPE。TCID50方法相对PFU方法而言有几个优点,如速度是PFU的2倍.结果更具预料性,在不同操作个体间也更稳定。
所有生物学方法所得到的结果在不同实验室之间往往有所差异,它主要与病毒感染方法有关。许多因素如加人的病毒储存液的量、管子的类型、培养的时间、细胞和培养液的量等都会影响结果。

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